Hiilic的“愛“與“恨”

Hilic模式色譜柱對于很多色譜分析工作者來說，總有說清的“愛“與“恨”。

愛的是他能解決一些常規(guī)C18搞不定的大極性化合物分析，無可替代；恨的是有時候用起來總是覺得不順心，一言不合就出現(xiàn)各種問題，峰型差、峰漂移、不出峰等等。

那碰到這樣的情況是不是色譜柱壞了，還是樣品出了什么問題？

其實不然，更多的時候是我們不了解其特性，沒把握住，沒有用好。

今天小編總結(jié)了幾道小伙伴們碰到的比較多的問題，一起來了解下Hilic色譜柱的特性，今后碰到問題不用怕，讓“恨”少一點。

Q1:Hilic是什么，什么時候用？

A:HILIC也叫親水作用色譜，是區(qū)別于反相液相色譜（RPLC）另一種作用模式，主要用于大極性化合物的保留和分離。

HILIC為親水大極性分析（LogP為負(fù)值）物提供了 RPLC的替代選擇，無需使用離子對試劑即可實現(xiàn)保留分離。

Q2:Hilic與RPLC反相C18有什么不同？

A:主要是作用機理不同，反相C18是根據(jù)分析物疏水性強弱不同保留和分離化合物，而HILIC保留機制包括各種極性相互作用和靜電相互作用 （即離子交換式）。

用HILIC對極性分析物進(jìn)行分析時，保留機制可能是其中的任意一種，也可能是所有機制同時作用。

比較直觀的表現(xiàn)兩者的不同，疏水化合物在反相C18上的保留順序與Hilic模式下剛好相反。

Q3:Hilic柱為什么重現(xiàn)性差，容易出現(xiàn)峰漂移、峰型差、不出峰的情況？

A:Hilic柱在連續(xù)進(jìn)樣后出現(xiàn)峰漂移、峰型差、不出峰的情況，多半是因為色譜柱活化平衡不好的原因。

由于Hilic色譜柱與分析化合物主要的作用都在固定相粒子表面的水合層，尤其是在大梯度的洗脫變化，更容易造成水合層的失衡，色譜柱原有的作用力產(chǎn)生變化，就會出現(xiàn)上述的種種現(xiàn)象。

Q4:Hilic柱怎么活化平衡？

A:通常在反相C18柱，柱平衡約為10倍柱體積即可，但是對于HILIC分離則不同，新啟用Hilic色譜柱需要60-80倍柱體積流動相平衡，第二次以及之后的每次運行，建議采用20倍柱體積流動相平衡。

實際中活化平衡的時間也會因項目的不同可能需要更長的時間，小編曾經(jīng)還碰到新柱子沖過夜才能正常出峰的例子。

         ACE 100 ?多孔柱達(dá)到20和60倍柱體積平衡所需的時間表

Q5:不同廠家的Hilic柱差異是不是比較大，為什么在做方法耐用性的時候發(fā)現(xiàn)很多同型號的Hilic柱無法重現(xiàn)？

A:不同廠家的Hilic柱差異還是比較大的，主要是填料的固定相差異，有采用非鍵合硅膠填料的，也有的是各種鍵合相硅膠填料的（這其中還包括酸性的、堿性的、中性的和新型的化學(xué)相）。

不同的固定相填料，色譜柱的選擇性會有很大的差異，保留不一樣，方法就難以重現(xiàn)。

PS:

*酸性ACE HILIC-A相，能形成負(fù)電荷，對帶正電的堿基（堿性物質(zhì)）產(chǎn)生靜電吸引，而帶負(fù)電的酸性物質(zhì)則被排斥。

*中性ACE HILIC-N相對陰陽離子都顯示出較低的離子交換能力,保留機制包括極性相互作用、吸附和一定的分散作用。

*堿性ACE HILIC-B相，能形成正電荷，對帶負(fù)電的酸性物質(zhì)產(chǎn)生靜電吸引，而帶正電的堿基（堿性物質(zhì)則）則被排斥。

Q6:用Hilic做方法開法怎么進(jìn)行，有沒有比較簡單流程步驟？

A:結(jié)合大極性分析物和Hliic色譜柱的特點，我們建立了一套可行的方法開發(fā)流程，可供大家參考。

需要更詳細(xì)的技術(shù)資料，或項目技術(shù)支持可以聯(lián)系我們。

Q7:Hilic色譜柱類型那么多，該怎么選擇合適？

A:要選擇合適的色譜柱，主要從所要分析的化合物去選擇。酸性極性化合物就選擇堿性硅膠固定相的Hilic色譜柱；反之，堿性極性化合物就選擇酸性硅膠固定相的；中性極性化合物

可選擇中性或者酸性、堿性都可以。ACE提供市面常見的酸性（Hilic-A）、堿性（Hilic-B）、中性（Hilic-A）三種固定相Hilic色譜柱方法開發(fā)包，可作為分析工作者的首選工具。

結(jié)語：小編今天給大家總結(jié)分享了一些工作中小伙伴們經(jīng)常問到的關(guān)于Hilic色譜柱的一些使用問題，希望能對我們分析工作者有所裨益，然小編才疏學(xué)淺，有相左之處歡迎大家不吝賜教。